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人多能干细胞消化液
产品基本信息
产品名称 | Applied Cell®人多能干细胞消化液 |
货 号 | AC-1001008 |
规 格 | 100mL |
运输保存条件 | 2-8℃，冰袋运输 |
使用范围 | 人多能干细胞(ES/iPS)消化后传代、冻存 |
保质期 | 12个月 |
产品简介
人多能干细胞消化液是埃泽思生物科技有限公司（Applied Cell®）自主研发的一款不含蛋白消化酶、专业应用于人多能干细胞消化传代的产品。本产品为温和高效型消化液，最大限度减少对干细胞消化损伤，传代存活率高，且消化时间3-5min即可，和传统细胞传代方法相比，简化细胞传代过程。本产品生产过程遵循ISO9001体系,并符合GMP指导原则。
产品特性
l 温和高效，传代存活率高。
l 简化细胞传代过程，省去挑克隆的操作。
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操作方法（此次操作以6孔板为例）
1） 清洗：准备预传代细胞，贴边缓慢加入预热2 mL PBS缓冲液并轻轻晃动，然后沿培养皿边缘吸去PBS缓冲液。
2） 消化：在6孔板中加入2 mL消化液使之覆盖皿底，并置于CO2培养箱中孵育2~5 min；
注意：细胞密度不同，消化时间略有调整，在显微镜下观察到大部分克隆边缘以及克隆内部细胞间出现间隙，即刻吸掉消化液停止消化。
3）吹打：吸掉人多能干细胞消化液后，立刻加入平衡好的 2mL干细胞培养基，用移液枪呈扇形吹打6孔板底，吹吸次数保持在3~5次，使皿底贴附的干细胞集落脱落，轻柔缓慢吹吸混匀，制成干细胞悬液，并将其转移到15mL离心管中；
注意：吹打细胞要轻柔，吹打次数在3~5次为宜，尽量避免形成单细胞。如有少量细胞无法从皿底脱落，属于正常现象。如有大量细胞无法从皿底脱落，需延长消化时间。
4）干细胞消化后，可以继续进行传代接种，也可以将干细胞进行冻存，步骤如下：
接种：1000 rpm/min离心3 min，弃上清，用室温平衡好的干细胞培养基缓吹打重悬细胞5-10次，并转移至包被好的培养板中，每孔2ml培养基。接种后显微镜下观察干细胞密度以及细胞团块大小，一般4个细胞以上的团块较合格，水平十字轻轻晃动6孔板，使细胞分布均匀。并置于CO2恒温培养箱培养，第2天观察细胞贴壁情况，每24h换液一次。
冻存：1000 rpm/min离心3 min，弃上清，加入2mL Serum-Free干细胞冻存液（AC-1001012），重悬3~5次后，将其加入到2mL冻存管中（注意：冻存液即用即拿，及时放回4℃冰箱。）。在冻存管上标记冻存细胞种类、时间、操作者及细胞批次，冻存管置于-80℃冰箱过夜，24h后将其转至于液氮中进行长期保存。
质量控制
检验项目 Test Catagories | 参考数据 Reference Data | 结果 The results |
外观 Physical APPearance | 无色液体 Colorless liquid | 符合规定 Conform to the provisions |
澄清度 Clarity | 澄清 Clear | 符合规定 Conform to the provisions |
pH值 Ph value | 6.9-7.3 | 符合规定 Conform to the provisions |
渗透压 Osmolality | 270-340 （mosm/KgH2O） | 符合规定 Conform to the provisions |
无菌 Sterility | 无菌 Sterility | 符合规定 Conform to the provisions |
支原体 Mycoplasma | 0.11um过滤，支原体试验为阴性 The mycoplasma test was negative after 0.11um filtration | 符合规定 Conform to the provisions |
