大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)elisa试剂盒
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产品名称: |
大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)elisa试剂盒 |
英文名称: |
Rat GM-CSF (Granulocyte-Macrophage colony Stimulating Factor) elisa Kit |
规格: |
48T/96T |
保存: |
2-8度保存 |
用途: |
科研使用,请勿用于临床诊断 |
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洗涤在 ELISA 过程中虽不是一个反应步骤,但却决定着实验的成败。ELSIA 就是靠洗涤来 达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或 抗体结合的物质,以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑 料对蛋白质的吸附是普遍性的,而在洗涤时应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可 以说在 ELISA 操作中,洗涤是最主要的关键技术,应引起操作者的高度重视,操作者应严格 按要求洗涤,不得马虎。
洗板时注意各种试剂盒的洗液不要混用。如果洗液需要稀释,应按要求稀释,所用的水电 导率最好在 1.5us/cm 之下,洗液如果结晶应待其融解后配制。保证洗板浸泡时间为 40 秒左 右,孔内液体被洗板机吸收得越干净洗涤效果更好,手工洗板防止洗液在孔内形成气泡。 |
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大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)elisa试剂盒 |
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问题:温育的注意事项?
答:由于试剂盒通常设定的反应温度为 37 度,在这个温度下放置 30 分钟,蒸发的水分 会很多,对于整个反应体系来讲,各种反应物的浓度会不断增加,这样必会导致反应最后的 值升高。因此温育时应盖上胶贴。 |
问题:实验操作中显示和比色的注意事项?
答:TMB 经 HRP 作用后,约 40 分钟显色达顶峰,随即逐渐减弱,至 2 小时后即可完全消退至 无色。TMB 的终止液有多种,叠氮钠和十二烷基硫酸钠(SDS)等酶抑制剂均可使反应终止。 这类终止剂尚能使蓝色维持较长时间(12-24 小时)不褪,是目视判断的良好终止剂。此外, 各类酸性终止液则会使蓝色转变成黄色,此时可用特定的波长(450nm)测读吸光值。 |
问题:OD值不正常,原因有哪些?
答:有可能是孵育时间不准确,应该控制孵育时间。洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长
洗涤次数增加,可以洗涤4-5次,每孔250ul,然后拍干。酶标仪的波长错误,酶标仪的波长450nm。或者是温度控制不好,控制正确温度。水质问题,使用矿泉水来代替。等等。 |
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