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蛋白N端C端测序

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最后更新: 2020-07-04 17:28
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公司基本资料信息
详细说明

蛋白合成起始于N-端,蛋白质N-端的序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着影响力。例如N-端序列影响蛋白质的半衰期,同时关联着蛋白亚细胞器定位等,这些与蛋白的功能和稳定性息息相关。对蛋白进行N-端测序分析,有利于帮助分析蛋白质的结构,了解蛋白质的生物学功能。

C端序列是蛋白质和多肽的重要结构与功能部位,对蛋白质的生物功能起作用。此外,由于蛋白翻译后在细胞内需要进一步剪切和修饰,通常不能简单的使用基因序列对C-端或N端做简单的预测,对于蛋白生物制品来说,使用C-端测序是可行的,随着蛋白质组学研究的不断深入,蛋白质C端测序对其功能研究将发挥作用。一些新的蛋白质C端测序方法已建立,提高了灵敏度和重复性,能够在蛋白质组水平应用。

技术原理

蛋白质和多肽N-端测序技术是以Edman化学降解法为基础的,Edman化学降解,其基本原理是包括通过异硫氰酸苯脂与蛋白质和多肽的N-端残基的偶联,苯氨基硫甲酰酞(PTC-肽)环化裂解,和噻唑呤酮苯氨(ATZ)转化为苯异硫尿氨基酸(PTH-氨基酸)三个主要的化学步骤,每个循环从蛋白质与多肽裂解一个氨基酸残基,同时暴露出新的游离的氨基酸进行下一个Edman降解,然后通过转移的PTH-氨基酸鉴定实现蛋白质序列的测定。

Edman 测序示意图

尽管Edman法技术已应用较多,但仍有不尽人意之处,例如Edman降解法不能解决N端封闭的测序问题(环化、封闭)、被修饰的蛋白不能给出确切的信号,要求蛋白或多肽的纯度在95%以上,灵敏度较低。质谱法不受N末端封闭的限制,能对侧链基团翻译后加工或化学修饰进行定位,灵敏度有提高,因而具有其优点,与传统的Edman降解法相互补。

质谱测序

蛋白质的C末端分析,并不能采取类似N端氨基酸序列分析的化学分析,现阶段是采取质谱法对蛋白质样品的C末端序列分析。其原理为利用蛋白质在质谱中会有规律的破碎,获得蛋白质肽段的碎片,分析图谱得到蛋白质的C-端序列。

样品要求:


http://www.abace-biology.com/Protein-N-end-C-end-sequencing.htm


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