点击图片查看原图
概述
这个呋喃唑酮ELISA检测试剂盒用于定量检测样品中的呋喃唑酮代谢产物的含量。如果要确证，可以采用传统的检测方法如：HPLC, GC/MS。
原理
这个呋喃唑酮（AOZ）ELISA检测试剂盒的原理是酶联免疫，应用于测定呋喃唑酮。在微孔中加入标准和样品，再加入AOZ-HRP酶结合物，微孔板包被有呋喃唑酮（AOZ）特异性抗体。这时样品中的呋喃唑酮和呋喃唑酮酶结合物竞争于包被在微孔板上的呋喃唑酮抗体结合。这个反应进行30min。经过洗板步骤，加入底物（显色剂）。通过显色剂来检测呋喃唑酮。底物（显色剂）含有双氧水和TMB。结合到呋喃唑酮抗体上的AOZ-HRP酶结合物催化底物产生有色物质。经过一个反应期加入稀酸（终止液）终止反应。用酶标仪读数。通过绘制标准曲线来测定样品中AOZ的含量。因为AOZ-HRP酶结合物和样品中的AOZ是竞争关系所以显色的深浅和样品中呋喃唑酮的含量成反比。
性能数据
敏感性：鱼、虾、鸡 0.1 ppb；混合饲料0.3 ppb
选择性：这个试剂盒只能测呋喃唑酮不能测定类似的化合物
样品：需要通过处理样品来消除基质效应
标准曲线：测定时靠近曲线的中间部位取值更为准确。
重复性：标准的变异系数(CVs) <10%；样品的变异系数(CVs) <15%；
交叉反应：
Furazolidone (AOZ) 100%
Furaltadone (AMOZ) <0.01%
Semicarbazide (SEM) <0.01%
1-aminohydantoin (AHD) <0.01%
试剂盒组成
1、真空包装微孔板（12×8条），包被有AOZ抗体
2、7瓶呋喃唑酮标准液，浓度分别为0, 0.0125, 0.025, 0.05, 0.1, 0.2,和0.5 ppb,每瓶1ml。（已经衍生化）
3、呋喃唑酮-HRP酶标记物12ml
4、样品处理缓冲液（10X）浓缩，50ml，用于稀释样品。
5、洗液/样品稀释液（10X）浓缩，50ml，
6、衍生化试剂 12ml
7、1瓶16mL底物（TMB）
8、1 瓶12mL终止液.
步骤
1、在对应的微孔中加入25 μL 标准或衍生化的样品。最好做重复。
2、用排枪在每个孔中都加入100μL酶标记物、然后用纸片盖住微孔，轻轻震荡微孔板30秒使孔中的液体混匀。
3、在室温下孵育30分。
4、将孔里的液体倒入合适的容器中，每个微孔至少加入250μL、1×洗液，然后弃掉洗液到合适的容器中，重复洗3次，共四次。在一层厚的吸水纸上拍板，去掉残留的洗液。
5、使用排枪在每个孔中加入100μL底物显色液，然后用纸片盖住微孔，轻轻震荡微孔板30秒使孔中的液体混匀。在室温孵育20分。尽量使其不见光。
6、每孔加入100μL终止液。
7、在加入终止液15分钟时间内，用酶标仪在450nm 下读取每个孔的吸光度值（OD）。
