打开离心机，冷却至4℃。并将所用试剂、缓冲液、实验、解剖工具、组织匀浆工具以及离心机转子等预冷至4℃（或放在冰上预冷）。
1.1麻醉
麻醉大鼠（麻醉药物注射/气体麻醉均可）
1.2分离步骤
a)处死大鼠，从颅骨中解剖大脑（可选择需要的脑区），将解剖后部分转移至4℃分离缓冲液A（缓冲液配方见文末）中，洗去杂质。
b)将组织从缓冲液取出，吸干多余水分，称量，测定湿重。称后，仍转移到转移至4℃分离缓冲液A中短时间保存
c)准备组织匀浆化：将组织取出，用分离缓冲液A润湿，用尖头剪刀（如眼科剪）将组织剪碎，剪至糊状小块。
d)使用4℃分离缓冲液A重悬组织糊状小块，然后转移到预冷玻璃容器或离心管（该步骤可选择将组织移入特定匀浆机套管中，重悬液体积可根据容器情况调整）中。
e)在1000转/分钟的转速下或手动玻璃研磨，研磨8-10次，得到均匀无块状组织液。
f)转移到50ml 离心管中，调整体积，得到约5%成分的匀浆液 (即每20 - 30ml匀浆液含有1g组织)。
g)4°C、1000 g离心10分钟，留下上清液。
h)将上清液转移到新管中， 4°C、6200 g离心10分钟，弃上清液。
i)使用分离缓冲液B重悬线粒体(沉淀)， 4°C、6200 g离心10分钟，弃上清液。
j)将沉淀物（即线粒体）重新悬浮在少量分离缓冲液B中（约1g组织中的线粒体悬浮液体积约1ml）。
k)将提取好的纯化线粒体用于实验。
2.1分离缓冲液A
化合物 | 最终浓度 | 1000 ml缓冲液所需量 |
Succrose | 320mM | 109.54 g |
Tris-Cl | 10mM | 1.211 g |
K+EDTA | 1mM | 0.372 g |
BSA | 2.5g/l | 2.5 g |
用Tris, HCl调节pH值至7.4
2.2 分离缓冲液B
不含BSA的分离缓冲液A。
Sumbalová Z, Kucharská J, Kristek F (2010) Losartan improved respiratory function and coenzyme Q content in brain mitochondria of young spontaneously hypertensive rats. Cell Mol Neurobiol 30:751-8.
1、独有的光电联合多参数实时动态检测技术：
电化学实时动态检测模块：pO2（高分辨率极谱氧电极传感器，耗氧率检测分辨率为±1 pmol O₂∙s-¹∙mL-¹）、pH、H2O2、TPP+（测量线粒体膜电位）、H2S、NO、质体醌；
荧光实时动态检测模块：MMP（测量线粒体膜电位）、ATP、Ca2+、ROS、NADH；
2、独有的原代细胞、原代组织能量代谢快速检测技术：
无需过夜培养、样品快速检测，更加客观反映样品更接近体内的能量代谢水平；
3、独有的多维度能量代谢分析平台：
适应线粒体、细胞、组织块、活检样品等不同层次不同水平的样本检测。
2
4孔板每孔单独进行实验，独立切向流换液、加药系统；
6
个试剂池，可实现4-5种药物重复、多次准确加入及更换；
同时检测产酸率、耗氧率、细胞膜电阻抗；
实现实时影像跟监测相结合的仪器；
全自动移液站，可实现连续监测几小时、几天、几周至数月的长期实验。
北京华威中仪科技有限公司成立于2006年，历经多年的积累与沉淀，华威公司已经成为国内领先实验室设备的供应商/技术服务商。
北京华威公司深耕中国细胞能量代谢市场十二年，为全国的科研用户提供从组织-细胞-线粒体一站式能量代谢解决方案。业务涵盖细胞能量代谢技术交流/实验技术支持/DEMO技术展示/设备销售/应用技术指导等。
生物体能量代谢研究适用于多种学科：运动生理学、线粒体医学、老龄化医学、干细胞医学、癌症、肥胖、糖尿病、氧化应激、药理与毒理、心血管类疾病、神经退行性病变等。
生物体能量代谢在科学研究中具有重要的论证地位，细胞器线粒体作为能量供应的主要场所，参与生物体内的绝大多数代谢过程，多种疾病的病理成因与线粒体损伤有关，通过预防线粒体损伤的发生、进行线粒体的移植治疗以及促进线粒体的再生与自噬，往往能够靶向针对疾病的病灶位点形成快速有效的治疗策略，从而达到早预防早治疗的目的；同样，能量代谢为生物起源、线粒体发生以及生态适应性等多个领域提供生物进化的直接或间接证据，也为研究多样化生态环境适应性、极端环境能量保障、能量供应大数据等方面提供理论基础。
华威公司全国区独家代理产品
德国INCYTON实时全息多参数细胞能量代谢分析系统
奥地利OROBOROS O2k细胞能量代谢分析仪
积极乐观、科学创新、永不言败是我们华威的精神，在过去十六年的工作中得到了广大用户的认可和高度评价，我们也会一如既往的坚持优质产品、优质服务继续服务于中国的科研事业。