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人间充质干细胞成骨分化试剂盒
产品基本信息
产品名称 | Applied Cell®人间充质干细胞成骨分化试剂盒 |
货 号 | AC-1001027 |
规 格 | 1kit |
保存条件 | 基础培养基2-8℃，添加剂-20--80℃保存； 混合后2-8℃保存，2-3周内使用完毕 |
使用范围 | 人间充质干细胞诱导分化成骨 |
保质期 | 1年 |
产品简介
人间充质干细胞成骨分化试剂盒是埃泽思生物（Applied CellTM）自主研发的一款用于人间充质干细胞诱导成骨分化的产品，可用于骨髓、脐带、脂肪等组织来源的间充质干细胞的诱导成骨分化。
产品特性
l 诱导分化程序简单便捷。
l 诱导成骨细胞效率高。
产品内容
试剂 | 规格 | 数量 | 运输 |
人间充质干细胞成骨分化基础培养基 | 90mL | 1 瓶 | 冰袋 |
人间充质干细胞成骨分化添加剂 Osteogenic Differentiation Supplement | 10mL | 1瓶 | 干冰 |
1. 相关材料
• Xeno-Free人间充质干细胞培养基（Applied Cell®:AC-1001003）
• 人间充质干细胞成骨分化试剂盒（Applied Cell®:AC-1001027）
• 成骨检测染液（Applied Cell®:AC-1001021）
• Xeno-Free细胞消化液（Applied Cell®:AC-1001024/1001025）
• 磷酸盐缓冲液(1×PBS) （Applied Cell®: Cat.AC-1001037）
2. 实验准备
人间充质干细胞成骨分化培养基配制：
2.1 2-8℃解冻人间充质干细胞成骨分化添加剂，轻晃摇匀；
2.2 随后将添加剂依次加入到人间充质干细胞成骨分化基础培养基中（添加剂10mL与90mL基础培养基彻底混合）混匀，即为人间充质干细胞成骨分化培养基。人间充质干细胞成骨分化培养基可在2-8℃稳定储存2-3周。
注意：人间充质干细胞成骨分化添加剂只能在2-8℃解冻，待添加剂加入到培养基以后，请用培养基润洗添加剂试管1-2次，因添加剂量较少可防止添加剂粘附在试管壁上造成损失。
3.实验操作
3.1诱导成骨（以6孔板为例）
3.1.1 使用细胞细胞包被液包被细胞培养板，将传代或复苏冻存的人间充质干细胞接种到6孔板上，密度为2×105 -3×105 cells/cm2或2×105 -3×105 cells/孔，置于37℃，5% CO2培养箱中培养，当细胞汇合度达到80%-90%时，小心的将孔内人间充质干细胞培养基吸掉，向6孔板中加入2 mL人间充质干细胞成骨分化培养基,以此记为第0天；
注意：成骨分化容易使细胞卷起，，成骨分化时应使用包被液包被细胞培养板。
3.1.2 每隔1-2天更换新鲜的人间充质干细胞成骨分化培养基；
注意：为防止成骨细胞脱落，建议成骨过程中出现大量钙结节之后，换液形式变为每天一次半量换液。
3.1.3 诱导14-21天期间，视细胞的形态变化及生长情况（如图1所示），可用成骨检测染液（Applied Cell:AC-1001021）进行染色。
人间充质干细胞在诱导成骨分化2天(A)、6天（B）、14天(C)的细胞照片，可以观察到成片的钙结节（100×）
3.2 成骨检测染液染色
3.2.1 诱导成骨分化结束后，吸掉6孔板中的成骨分化培养基，用PBS冲洗1-2次。每孔加入1 mL细胞固定液，固定10~30 min；
3.2.2 吸掉细胞固定液，PBS冲洗2次。每孔加入2 mL成骨检测染液，染色3-5 min；
3.2.3 吸掉成骨检测染液，用PBS冲洗2-3次；
3.2.4 将培养板置于显微镜下观察成骨染色效果（如图2所示）。
人间充质干细胞在诱导成骨后成骨检测染液染色前（D）和染色后(E)的照片（200×）