北京信科奥达科技有限公司测序项目
简称“信科奥达”,主营生物技术服务及其配套试剂、耗材、仪器的研发、生产和销售,秉承“专业、求实、开拓、创优”的服务理念,为客户提供专业化的技术服务及解决方案。
测序项目总项目:
1、常规sanger测序:
EST测序
菌液测序
PCR产物测序说
T载体克隆测序
外显子测序
2、基因序列分析:
普通/荧光定量引物设计与合成
测序/飞行质谱/荧光定量法SNP多态性检测分析
STR/SSR检测分析,全基因合成
多肽合成
载体构建与表达
3、核酸提取:
植物、动物、全血、细菌等各种组织DNA/RNA提取
测序具体内容:
荧光定量技术服务
一、 项目简介
1、TaqMan探针方法
2、SYBR Green I嵌合荧光法
3、在聚合延伸过程中,引物退火并形成PCR产物。
4、聚合完成后,SYBR Green染料与双链产物结合,定量PCR系统检测到荧光的净增量加大。
二、 服务项目:定性分析,绝对定量,相对定量(mRNA表达量分析)
三、 服务流程
1、客户以电话或邮件形式告知公司要进行的实验基因名称和标本数目;
2、公司派专业技术人员与您洽谈实验费用和荧光定量探针设计方案(序列和设计有公司负责);
3、签订实验技术服务合同,交费用的50%作为订金(若实验没有结果或结果未达到客户要求,订金不退);
4、公司合成荧光定量探针、派相关人员取回实验标本;
5、进行RNA抽提、鉴定、cDNA合成实验;
6、进行实时荧光定量PCR实验(每个标本的每个基因均进行3倍平行孔实验,保证获得准确、无误差、客观的样品基因扩增数据);
7、通过统计分析软件计算目的基因的mRNA表达数据;
8、提供完整的实验报告(实时荧光扩增曲线图、分析数据、实验步骤、试剂仪器);
9、客户交齐全额费用。
四、 服务要求
1、请认真填写Real Time PCR检侧技术服务委托单;
2、请您提供新鲜的且尽量多的材料(各种材料的 RNA 提取量请参照“总 RNA 的提取”),或直接提供纯化好的总RNA(大于5μg/样品);(各种材料的 DNA 提取量请参照“ D NA 的提取”),或直接提供纯化好的DNA(大于5μg/样品) ;
3、如果提供的材料为细胞或组织,应保证材料新鲜:
细胞样品:细胞培养至少达105以上,培养后细胞请勿做任何处理。
组织样品:离体后30分钟内入液氮保存,动物组织为5mg以上。
血液样品:分离白细胞后,-70℃保存。
4、请通过 E-mail 提供已知的全长基因序列;
5、请提供尽可能详细的背景资料: DNA/ RNA 来源、丰度等。
五、 配套服务项目:引物(探针)设计和筛选,基因组DNA提取组织,基因组RNA提取,质粒构建,RT-PCR反应
双荧光素酶报告基因检测服务
双荧光素酶报告基因法(luciferase Assay)检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用。
转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子,也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异顺序结合,这些特异性的序列被称为顺式因子,转录因子的DNA结合域和顺式因子实现共价结合,从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验(luciferase Assay)是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段,其原理简述如下:
(1) 构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒,如pGL3-basic等。
(2) 将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系。如果此转录因子能够激活靶启动子,则荧光素酶基因就会表达,荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。
(3) 加入特定的荧光素酶底物,荧光素酶与底物反应,产生荧光素,通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性,从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作用。
实验步骤:
(1) 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。
(2) 设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段,将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒(pGL3-basic)中。
(3) 筛选阳性克隆,测序。扩增克隆并提纯质粒备用。
(4) 扩增转录因子质粒,提纯备用。同时准备相应的空载质粒对照,提纯备用。
(5) 培养293(或其它目的细胞),并接种于24孔板中,生长10-24小时(80%汇合度)。
(6) 将报告基因质粒与转录因子表达质粒共转染细胞。
(7) 提取蛋白并用于荧光素酶检测。
(8) 加入底物,测定荧光素酶的活性。
(9) 计算相对荧光强度,并与空载对照比较。
收费情况请电询
质谱鉴定技术服务
1、 简介
基质辅助激光解析电离飞行时间质谱MALDI-TOF-MS可测定生物大分
分子量高达600KDa。通过肽质量指纹谱(PMF)和肽序列标签(PST)技术可高灵敏度、高通量、快速鉴定蛋白质,是蛋白质组学研究必不可少的生物质谱,也是临床蛋白质组学首选的技术。还可分析寡核苷酸序列、多糖结构、聚合物分子量分布、特殊合成化学品等。公司拥有Bruker Ultraflex MALDI/TOF-TOF质谱,为广大客户提供质谱鉴定相关技术服务。
2、 收费标准
项目 参考价格 说明
胶内酶切 150元
肽质量指纹图分析 450元/样品 考染
多肽和蛋白质分子量测定 180元/样品
串联质谱测序 600元/肽段
多肽和蛋白质的纯度测定 350元/样品
数据库查询与结果分析 200元/个数据
3、 培训及送样须知
送样品可为冻干粉、溶液或胶内蛋白质(最好为考染),冻干粉、溶液应无盐。样品如有毒性或腐蚀性或需特殊保存的样品,请事先说明。