摘要:分子生物技术越来越发达的今天,随着各种DNA提取方法的横空出世,广大学者众说纷纭。DNA的提取过程犹如白居易的诗句一样“千呼万唤始出来,犹抱琵琶半遮面”。如何选择合适的DNA提取方法,解开DNA的神秘面纱,成了人们重点关注的对象。
目前,“高质量、高产量、高效率、高通量”的快速DNA提取,已经成为现代分子生物学的主流,是广大实验研究学者注重的方向。下面我们来一一揭开现阶段各种DNA提取方法的面纱。
①碱裂解法DNA提取:此方法基于DNA的变性与复性差异而达到分离的目的。
②煮沸法DNA提取:煮沸时将样品中的DNA通过核酸裂解液的作用释放出来,离心沉淀后将杂质去除,上清液即可用作PCR扩增。
③浓盐法DNA提取:利用RNA和DNA在电解溶液中溶解度不同,将二者分离。
④苯酚抽提法DNA提取:利用DNA与蛋白质的溶解特性将两种物质分别溶于水和苯酚中,从而将二者分离。
⑤水抽提法DNA提取:利用核酸溶于水的的性质,用低盐溶液除去RNA,将沉淀溶于水,使DNA充分溶于水中。此法提取的DNA中含有较多的蛋白质,可以在此法的基础上,在提取过程中加入SDS。
⑥离心柱法DNA提取:采用特殊硅基质材料在一定的高盐缓冲系统下高效、专一地吸附DNA、RNA。
⑦磁珠法DNA提取:此法中的细胞裂解液可以使细胞裂解,并使DNA结合的蛋白质变性,DNA游离释放,磁珠可以特异性地吸附DNA,通过洗涤,去除DNA以外的RNA、蛋白质等杂质,再因洗脱液解离吸附在磁珠上的DNA,得到纯度和浓度均等很高的DNA,可直接用于PCR模板、基因工程等。
通过以上各种方法的介绍,以及根据我个人近些年运用上述方法得出的结果,个人总结出了下面的“封神榜”,仅供大家参考:
方法 | 排行 | 封神人物 | 耗时 | 苯酚或氯仿 | 杂质 | OD260/OD230 | OD260/OD280 |
磁珠法 | 鸿钧道人 | 很短 | 无 | 很少 | 1.7-2.0 | 2.0以上 |
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离心柱法 | 通天教主 | 较短 | 无 | 较少 | 1.6-1.8 | 1.0以上 |
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苯酚抽提法 | 老子 | 短 | 有 | 少 | 1.7左右 | 1.0以上 | |
碱裂解法 | 接引道人 | 较长 | 无 | 多 | 1.7左右 | 2.0以上 | |
浓盐法 | 元始天尊 | 长 | 有 | 多 | 1.5左右 | 1.2左右 | |
水抽提法 | 准提道人 | 短 | 无 | 多 | 1.5左右 | 1.2左右 | |
煮沸法 | 多宝道人 | 较长 | 无 | 多 | 1.5左右 | 1.2左右 |
根据以上的对比,我个人比较倾向于磁珠法提取DNA,我向大家推荐河南惠尔纳米科技有限公司(http://www.huierbio.com)的磁珠法DNA提取试剂盒,据我了解,他们公司的试剂盒完全自主研发与生产,对于使用者能给与很大的指导与帮助,并具备七大优点:无毒无害、操作简便、效果稳定、价格便宜、产量高、纯度高、通量高。